六。检查化验
(一)外周血象
1、外周血细胞分析诊断标准:
(1)多数患者白细胞计数在正常范围内,部分患者白细胞减低,白细胞计数参考值范围(4~10)×109L。
(2)大多数SARS患者淋巴细胞计数绝对值减少,呈逐步减低趋势,并有细胞形态学变化。
2、结果解释
国内外不同文献报道的结果有所差别,造成这些差别的可能原因如下:
(1)SARS-CoV主要作用于淋巴细胞(特别是T淋巴细胞),使外周血淋巴细胞数减低,而淋巴细胞在白细胞总数中占的比例较低(参考范围0。20~0。40),除非淋巴细胞明显减少,SARS患者的白细胞不会受到明显的影响,但此时淋巴细胞绝对值会有明显变化。另外,白细胞还受其他因素影响,如SARS患者合并感染时,中性粒细胞(占白细胞的50%以上)增高可使白细胞明显升高。因此,初诊SARS患者,观察淋巴细胞绝对值的变化可能更有诊断意义。
(2)文献报道,诊断淋巴细胞减低的临界值(cutoff值)为1。2×109L可作为诊断SARS的辅助诊断指标;(0。9-1。2)×109L为可疑;>1。2×109L不支持SARS诊断。
(3)值得指出的是,在SARS疫情中,多数实验室进行血细胞分析使用的是电阻法血细胞分析仪,其血细胞分类的原理是基于白细胞形态正常,根据细胞大小产生的脉冲大小进行细胞分类计数。换言之,只有细胞形态正常才能保证白细胞分类计数相对准确,根据对200多例SARS或“疑似”患者血涂片的观察,发现淋巴细胞和中性粒细胞均有中毒性变化及细胞体积的变化,约60%以上有“核凝”、“核固缩”和胞质中含中毒颗粒及空泡,70%以上的中性粒细胞有“核脊突”,这会影响仪器分类的准确性。因此在进行血细胞分析时,在做好防护条件下应重视血细胞显微镜检查,或使用高档“五分类”血细胞分析仪进行检查。
(二)SARS特异性抗体
1、特异性抗体检测标准
符合以下两者之一即可判断为SARS:
(1)平行检测进展期血清抗体和恢复期血清抗体发现抗体阳转。
(2)平行检测进展期血清抗体和恢复期血清抗体发现抗体滴度4倍及以上升高。
2、技术说明
(1)方法:WHO推荐酶联免疫吸附试验(enzymelinkedimmuassay,ELISA)或免疫荧光试验(immunofluoresceassay,IFA)作为血清SARS-CoV抗体检测方法。
(2)双份血清标本:SARS感染血清学诊断双份血清标本是最可靠的。注意尽可能早地采取进展期标本。
(3)平行检测:进展期和恢复期血清标本平行检测是非常重要的。ELISA法检测时应将双份血清标本置于同一块酶免疫反应板内,IFA法检测时应将双份血清标本置于同一张玻片,这样检测抗体滴度才有可比性。
(4)检测抗体的种类:国内目前SARS-CoV抗体检测包括IgG、IgM或总抗体,其中任何一种抗体发生阳转或4倍及以上升高,均可诊断SARS。因IgG抗体持续时间较长,最好检测IgG抗体。
(5)试剂盒:应有国家有关机构颁发的应用许可证。
3、结果解释
进展期血清抗体和恢复期血清抗体发现抗体阳转或4倍以上升高,诊断SARS-CoV近期感染。
根据WHO的资料,ELISA法检测患者血清SARS-CoV抗体时使用发病21天后的血清标本所得结果比较可靠,而IFA法使用发病10天后的血清标本所得结果比较可靠。绝大多数SARS患者症状出现1个月内,应可浊出IgG抗体。
需要注意的是,有些SARS患者血清抗体(IgG和或IgM)在进展期已为阳性,恢复期血清没有4倍及以上升高,但这些患者双份血清存在高滴度的抗体,可结合临床进行诊断。未检测到SARS-CoV抗体不能排除SARS-CoV感染。血清学抗体检测不作为早期诊断依据,检测及分析结果时应考虑试剂盒的质量。
(三)SARS-A
1、SARS-A阳性判断标准
应用PCR方法,符合下面三项之一者可判断为检测结果阳性:
(1)至少需要两个不同部位的临床标本检测阳性(例:鼻咽分泌物和粪便)。
(2)收集至少间隔两天的同一种临床标本送检检测阳性(例:两份或多份鼻咽分泌物)。
(3)在每一个待定检测中对原临床标本使用两种不同的方法,或重复PCR方法检测阳怀。